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BioRad | ddPCR Digital

La Tercera Generación de la PCR: Fundamentos, aplicaciones y técnicas del Sistema QX200™

 
 
La  PCR digital en gota QX200 de BioRad, es un refinamiento de la PCR convencional que permite la medición directa del blanco amplificado.

El sistema consta de un generador de gotas que emulsiona la mezcla de reacción en 20.000 gotas por pocillo. Cada gota contiene al menos una copia del ácido nucleico. La mezcla emulsionada es transferida a un termociclador para la amplificación del blanco. Posteriormente las gotas son leídas en el lector del sistema, midiendo la fluorescencia, siendo su intensidad directamente proporcional al número de copias de amplificado.

La PCR digital en gota es considerada una PCR de tercera generación debido a la medición directa de la intensidad de fluorescencia, sin la necesidad de estándares ni de genes de referencia; la fracción de los negativos es ajustada a un algoritmo de Poisson para determinar el número de copias absolutas, dando lugar a resultados en copias por ul de entrada de muestra la cual permite una cuantificación absoluta.
A diferencia de la PCR en tiempo real, la eliminación del efecto del ruido de fluorescencia permite detectar blancos en muy bajo números de copias,  ya que en la qPCR los blancos que se encuentran en el límite de detección, quedando por debajo de la línea de base, produciendo falsos negativos. Por otro lado, enriquece los eventos raros, pues al convertirse cada gota en un tubo de reacción aumenta su proporción.

Debido a las cualidades y beneficios de esta metodología sobre las existentes, ha encontrado rápidamente aplicación en las ciencias de la salud y de las ciencias agrícola-ganaderas.

 
     
 
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